На правах рекламы

Введение
Высококачественный молочный продукт должен соответствовать ФЗ №88 «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» не только по показателям пищевой ценности и органолептическим характеристикам, но прежде всего по безопасности потребления. Однако в последние годы наблюдается рост алиментарно-зависимых заболеваний, а вопросы гигиены производства молока и контроля его качества приобретают особое значение.

Крайне негативное влияние на развитие молочной индустрии оказывают заболевания животных, среди которых наибольшее значение имеет мастит коров, приводящий к недополучению большого количества молока и преждевременной выбраковке животных. Выделение значительного процента энтеротоксигенных стафилококков из проб маститного молока указывает на то, что вымя больных коров является резервуаром энтеротоксигенных культур, которые инфицируют новорожденных телят при скармливании им молока и молозива, а также вызывают пищевые отравления людей при употреблении ими молока и молочных продуктов.

Интоксикации стафилококковой природы характеризуются тем, что они развиваются в результате воздействия на организм энтеротоксинов, а не живых микробных клеток. Кипячение и стерилизация продуктов убивает стафилококки, но не разрушает токсины. Окончательная их инактивация наступает только после 2,5-3 ч кипячения. В этой связи, при выявлении причин пищевых отравлений необходимо определять как патогенные микроорганизмы, так и энтеротоксины.

Определение энтеротоксигенности изолированных культур стафилококков обязательно используется для их идентификации. Для эффективной оценки роли стафилококков в возникновении пищевых отравлений самого факта выделения культуры стафилококков, даже коагулозопозитивных, недостаточно, тем более что в пищевых продуктах, содержащих патогенные дозы энтеротоксина, жизнеспособные микробные клетки могут и не выявляться. В этой связи, в процессе биологической диагностики стафилококковых пищевых отравлений необходимо ставить две задачи: найти энтеротоксигенные стафилококки и выявить энтеротоксин. Оба патогена надо искать на всех стадиях получения и переработки молока, и тогда определение стафилококков позволит конкретно выяснить источник и механизм развития патологического процесса, а нахождение энтеротоксина в продукте и в материале от потерпевших – окончательно подтвердить диагноз пищевой стафилококковой интоксикации.

Иммуноферментный анализ – один наиболее перспективных и быстро развивающихся методов исследования биологически активных веществ. Технология иммуноферментного анализа постоянно совершенствуются, повышается чувствительность и специфичность тест-систем, подбираются наиболее удобные условия работы, сокращается число этапов проведения исследований, что уменьшает вероятность ошибки при выполнении анализа.

Материалы и методы исследований
Образцы сборного молока и молока от здоровых и больных маститом коров отбирались в хозяйствах и частных подворьях Московской, Вологодской и Смоленской областей. Выделение золотистых стафилококков и определение их ДНК-азной и плазмокоагулирующей способностей проводили согласно «Методическим указаниям по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров» (1983), в соответствии с ГОСТ 30347-97 «Молоко и молочные продукты. Метод определения Staphylococcus aureus» и по методическим рекомендациям МР 02.011-06 «Ускоренные методы выявления санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов с использованием подложек RIDA®COUNT». Для определения энтеротоксинов стафилококка использовали тест-систему RIDASCREEN®SET (R-Biopharm AG, Дармштадт, Германия) согласно методическим указаниям МУК 4.2. 2429-08 «Метод определения стафилококковых энтеротоксинов в продуктах питания». Чувствительность тест-системы RIDASCREEN®SET составляет 0,2 нг/мл, время выполнения анализа – около 3,5 часов.

Результаты исследований
Для изучения уровня обсеменения молока золотистыми стафилококками на фермах и частных подворьях Московской, Вологодской и Смоленской областей были проведены микробиологические исследования 442 проб сборного молока и секрета вымени от лактирующих коров с различным состоянием вымени.

Таблица 1 Количество S. aureus и энтеротоксигенных штаммов золотистого стафилококка, выделенных из сборного молока и от лактирующих коров с различным состоянием вымени

При мониторинге S. aureus в хозяйствах трех областей (таблица 1) из молока и секрета вымени здоровых и больных маститом коров было выделено 168 штаммов (38%) золотистого стафилококка, которые проявляли ДНК-азную активность и коагулировали кроличью плазму, из них 8 (8,7%) штаммов из молока клинически здоровых животных, 128 (59,3%) – из молока коров, больных субклиническим маститом, в 2 раза меньше, 21 (28,8%) штамм – из секрета вымени коров с клинической формой мастита и 11 штаммов (18,0%) – из сборного молока, что в 3,2 раза ниже, чем из молока животных с субклинической формой воспаления.
Некоторые результаты анализа молока с помощью подложек RIDA®COUNT показаны на нижеприведенных рисунках 1-4.

Рисунок 1 Золотистый стафилококк (3 КОЕ)

Рисунок 2 Золотистый стафилококк (18 КОЕ)

Рисунок 3 Золотистый стафилококк (180 КОЕ)

Рисунок 4 Золотистый стафилококк (1800 КОЕ)

При определении энтеротоксигенности S.aureus показано, что в сборном молоке выявляется 36,4% энтеротоксигенных стафилококков, тогда как в молоке здоровых коров и секрете вымени больных клиническим маститом – 25,0 и 33,3%, соответственно. Наибольшее количество S. аureus, вырабатывающих энтеротоксины, выявлялось в молоке животных с субклинической формой мастита (42,2%), что коррелирует со значительным процентом обнаружения золотистых стафилококков при этой форме заболевания (таблица 1).

Проведены также исследования по определению типов энтеротоксинов, выявленных из культур золотистого стафилококка (см. диагр.).

Диаграмма Типы стафилококковых энтеротоксинов, вырабатываемых энтеротоксигенными S. aureus, выделенными из сборного молока и секрета вымени лактирующих коров

Как видно из представленных на диаграмме данных, чаще всего выявлялись энтеротоксины типа С (53,8% от числа энтеротоксигенных стафилококков), причем количество распределялось приблизительно в равной пропорции между штаммами S. aureus, выделенными из сборного молока и секрета вымени коров с различным состоянием молочной железы; по 13,4% – типы D (были обнаружены только у клинически больных коров) и СD (чаще у здоровых коров – 50% от числа всех выделенных штаммов, вырабатывающих энтеротоксин тип СD). Что касается других типов энтеротоксинов, выявленных среди энтеротоксигенных стафилококков, то обнаруживались следующие: A, B, AB, BC, ABC, ACD и CDE – в количестве от 1,5 до 4,5%.

Заключение
Проведены исследования по выявлению энтеротоксигенных штаммов золотистого стафилококка в сборном молоке и молоке коров с различным состоянием молочной железы, определены типы энтеротоксинов и частота их обнаружения. В результате выявлено, что наиболее часто из секрета вымени коров, больных субклиническим и клиническим маститом выделялся золотистый стафилококк, образующий энтеротоксины типов С, D и CD.

Н.А. Шурдуба, В.М. Сотникова,
ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии
А.В. Галкин,
ООО «Компания Стайлаб»
+7(495) 729-17-04